ZHRNUTIE A VYSVETLENIE TESTU
Malária je hemolytické horúčkovité ochorenie prenášané komármi, ktoré infikuje viac ako 200 miliónov ľudí a ročne zabije viac ako 1 milión ľudí.Spôsobujú ho štyri druhy Plasmodium: P. falciparum, P. vivax, P. ovale a P. malariae.Všetky tieto plazmódie infikujú a ničia ľudské erytrocyty, spôsobujú zimnicu, horúčku, anémiu a splenomegáliu.P. falciparum spôsobuje závažnejšie ochorenie ako iné plazmodiálne druhy a zodpovedá za väčšinu úmrtí na maláriu.P. falciparum a P. vivax sú najbežnejšími patogénmi, existujú však značné geografické rozdiely v distribúcii druhov.
Tradične je malária diagnostikovaná demonštráciou organizmov na Giemsa zafarbených hrubých náteroch periférnej krvi a rôzne druhy plazmódií sa odlišujú ich výskytom v infikovaných erytrocytoch.Táto technika je schopná presnej a spoľahlivej diagnostiky, ale iba ak ju vykonávajú skúsení mikroskopisti s použitím definovaných protokolov, čo predstavuje veľké prekážky pre vzdialené a chudobné oblasti sveta.
Na riešenie týchto prekážok je vyvinutý rýchly test malárie Pf/Pv Ag.Využíva protilátky špecifické pre proteín bohatý na histidín II (pHRP-II) z P. falciparum a laktátdehydrogenázu (Pv-LDH) z P. vivax na súčasnú detekciu a rozlíšenie infekcie spôsobenej P. falciparum a P. vivax.Test môže vykonávať nezaškolený alebo minimálne kvalifikovaný personál, bez laboratórneho vybavenia
PRINCÍP
Malaria Pf/Pv Ag Rapid Test je laterálny prietokový chromatografický imunotest.Prúžkové testovacie komponenty pozostávajú z: 1) bordovo sfarbenej konjugovanej podložky obsahujúcej myšaciu anti-Pv-LDH protilátku konjugovanú s koloidným zlatom (konjugáty Pv-LDH-zlato) a myšaciu anti-pHRP-II protilátku konjugovanú s koloidným zlatom (pHRP-II-zlaté konjugáty), 2) testovací prúžok a prúžok s nitrocelulózovou membránou obsahujúci dva prúžky s nitrocelulózovou membránou.Pás Pv je vopred potiahnutý ďalšou myšou anti-Pv-LDH špecifickou protilátkou na detekciu infekcie Pv, pásik Pf je vopred potiahnutý polyklonálnymi protilátkami anti-pHRP-II na detekciu infekcie Pf a pásik C je potiahnutý kozím anti-myším IgG.
Počas testu sa do jamky na vzorku (S) testovacej kazety nadávkuje primeraný objem vzorky krvi, do jamky s pufrom (B) sa pridá lyzačný pufor.Pufor obsahuje detergent, ktorý lýzuje červené krvinky a uvoľňuje rôzne antigény, ktoré migrujú kapilárnym pôsobením cez prúžok držaný v kazete.Pv-LDH, ak je prítomný vo vzorke, sa bude viazať na konjugáty Pv-LDH-zlato.Imunokomplex je potom zachytený na membráne pomocou vopred potiahnutej anti-Pv-LDH protilátky, čím sa vytvorí vínovo sfarbený Pv pás, čo indikuje Pv pozitívny výsledok testu.Alternatívne sa pHRP-II, ak je prítomný vo vzorke, naviaže na konjugáty pHRP-II-zlato.Imunokomplex je potom zachytený na membráne vopred potiahnutými anti-pHRP-II protilátkami, čím sa vytvorí bordovo sfarbený Pf pás, čo indikuje Pf pozitívny výsledok testu.Absencia akýchkoľvek testovacích prúžkov naznačuje negatívny výsledok.Test obsahuje vnútornú kontrolu (pás C), ktorý by mal vykazovať bordovo sfarbený pás imunokomplexu kozieho anti-myšieho IgG/myšieho IgG (anti-Pv-LDH a anti-pHRPII)-zlatého konjugátu bez ohľadu na vývoj farby na ktoromkoľvek z testovacích pásikov.V opačnom prípade je výsledok testu neplatný a vzorka sa musí znova otestovať iným zariadením.
