ZHRNUTIE A VYSVETLENIE TESTU
Malária je hemolytické horúčkovité ochorenie prenášané komármi, ktoré infikuje viac ako 200 miliónov ľudí a ročne zabije viac ako 1 milión ľudí.Spôsobujú ho štyri druhy Plasmodium: P. falciparum, P. vivax, P. ovale a P. malariae.Všetky tieto plazmódie infikujú a ničia ľudské erytrocyty, spôsobujú zimnicu, horúčku, anémiu a splenomegáliu.P. falciparum spôsobuje závažnejšie ochorenie ako iné plazmodiálne druhy a zodpovedá za väčšinu úmrtí na maláriu a je jedným z dvoch najbežnejších patogénov malárie.
Tradične je malária diagnostikovaná demonštráciou organizmov na Giemsa zafarbených hrubých náteroch periférnej krvi a rôzne druhy plazmódií sa odlišujú ich výskytom v infikovaných erytrocytoch.Táto technika je schopná presnej a spoľahlivej diagnostiky, ale iba ak ju vykonávajú skúsení mikroskopisti s použitím definovaných protokolov, čo predstavuje veľké prekážky pre vzdialené a chudobné oblasti sveta.
Na riešenie týchto prekážok je vyvinutý rýchly test Pf Ag.Deteguje Pf špecifický antigén pHRP-II vo vzorke ľudskej krvi.Môže ho vykonávať nezaškolený alebo minimálne kvalifikovaný personál, bez laboratórneho vybavenia.
PRINCÍP
Pf Ag Rapid Test je laterálna prietoková chromatografická imunoanalýza.Komponenty testovacieho prúžku pozostávajú z: 1) bordovo sfarbenej konjugovanej podložky obsahujúcej monoklonálnu protilátku anti-PHRP-II konjugovanú s koloidným zlatom (konjugáty pHRP II-zlato), 2) prúžku s nitrocelulózovou membránou obsahujúceho testovací prúžok (Pf) a kontrolný prúžok (prúžok C).Pás Pf je vopred potiahnutý polyklonálnymi anti-pHRP-II protilátkami a pás C je vopred potiahnutý kozím anti-myším IgG.
Počas testu sa do jamky na vzorku (S) testovacej kazety nadávkuje primeraný objem vzorky krvi, do jamky s pufrom (B) sa pridá lyzačný pufor.Pufor obsahuje detergent, ktorý lýzuje červené krvinky a uvoľňuje antigén pHRPII, ktorý migruje kapilárnym pôsobením cez prúžok držaný v kazete.pHRP-II, ak je prítomný vo vzorke, sa naviaže na konjugáty pHRP II-zlato.Imunokomplex je potom zachytený na membráne vopred potiahnutými polyklonálnymi antipHRP II protilátkami, čím sa vytvorí vínovo sfarbený Pf pás, čo indikuje Pf pozitívny výsledok testu.
Absencia Pf pásma naznačuje negatívny výsledok.Test obsahuje internú kontrolu (prúžok C), ktorý by mal vykazovať bordovo sfarbený pruh imunokomplexu kozieho anti-myšieho IgG / myšieho IgG (konjugáty pHRP II – zlato) bez ohľadu na vývoj farby na ktoromkoľvek z pruhov Pf.V opačnom prípade je výsledok testu neplatný a vzorka sa musí znova otestovať iným zariadením.
