ZHRNUTIE A VYSVETLENIE TESTU
Malária je hemolytické horúčkovité ochorenie prenášané komármi, ktoré infikuje viac ako 200 miliónov ľudí a ročne zabije viac ako 1 milión ľudí.Spôsobujú ho štyri druhy Plasmodium: P. falciparum, P. vivax, P. ovale a P. malariae.Všetky tieto plazmódie infikujú a ničia ľudské erytrocyty, spôsobujú zimnicu, horúčku, anémiu a splenomegáliu.P. falciparum spôsobuje závažnejšie ochorenie ako iné plazmodiálne druhy a zodpovedá za väčšinu úmrtí na maláriu.P. falciparum a P. vivax sú najbežnejšími patogénmi, existujú však značné geografické rozdiely v distribúcii druhov.
Tradične je malária diagnostikovaná demonštráciou organizmov na Giemsa zafarbených hrubých náteroch periférnej krvi a rôzne druhy plazmódií sa odlišujú ich výskytom v infikovaných erytrocytoch1.Táto technika je schopná presnej a spoľahlivej diagnostiky, ale iba ak ju vykonávajú skúsení mikroskopisti s použitím definovaných protokolov2, čo predstavuje veľké prekážky pre vzdialené a chudobné oblasti sveta.
Na riešenie týchto prekážok je vyvinutá súprava na rýchly test malárie Pf / Pan Antigen.Test využíva pár monoklonálnych a polyklonálnych protilátok proti špecifickému proteínu P. falciparum, Histidine Repeat Protein II (pHRP-II) a pár monoklonálnych protilátok proti plazmodium laktátdehydrogenáze (pLDH), proteínu produkovaném štyrmi druhmi plazmódia, a tak umožňuje súčasnú detekciu a diferenciáciu ďalších troch plazmódií alebo infekcií P.cifalopar.Môže ho vykonávať nezaškolený alebo minimálne kvalifikovaný personál, bez laboratórneho vybavenia.
PRINCÍP
Súprava Pf/Pan Malaria Rapid Test je laterálna prietoková chromatografická imunoanalýza.Komponenty testovacieho prúžku pozostávajú z: 1) bordovo sfarbenej konjugovanej podložky obsahujúcej myšaciu protilátku anti-PHRP-II konjugovanú s koloidným zlatom (konjugáty pHRP II-zlato) a myšaciu protilátku anti-pLDH konjugovanú s koloidným zlatom (konjugáty pLDH-zlato),
2) prúžok z nitrocelulózovej membrány obsahujúci dva testovacie pásy (Pan a Pv pásy) a kontrolný pás (C pás).Pás Pan je vopred potiahnutý monoklonálnou anti-pLDH protilátkou, pomocou ktorej možno detegovať infekciu ktorýmkoľvek zo štyroch druhov plazmódií, pás Pf je vopred potiahnutý polyklonálnymi protilátkami anti-pHRP-II na detekciu infekcie Pf a pásik C je potiahnutý kozím anti-myším IgG.
Počas testu sa do jamky na vzorku (S) testovacej kazety nadávkuje primeraný objem vzorky krvi, do jamky s pufrom (B) sa pridá lyzačný pufor.Pufor obsahuje detergent, ktorý lýzuje červené krvinky a uvoľňuje rôzne plazmódiové antigény, ktoré migrujú kapilárnym pôsobením cez prúžok držaný v kazete.pHRP-II, ak je prítomný vo vzorke, sa naviaže na konjugáty pHRP II-zlato.Imunokomplex je potom zachytený na membráne vopred potiahnutými anti-pHRPII protilátkami, čím sa vytvorí bordovo sfarbený Pf pás, čo indikuje Pf pozitívny výsledok testu.Ak je pLDH prítomný vo vzorke, bude sa viazať na zlaté konjugáty pLDH.Imunokomplex sa potom zachytí na membráne pomocou vopred potiahnutej protilátky proti pLDH, čím sa vytvorí vínový pásik Pan, čo indikuje pozitívny výsledok testu na plazmódiu.V neprítomnosti Pan bandu možno odporučiť pozitívny výsledok testu na ktorúkoľvek z ďalších troch plazmódií.
Absencia akýchkoľvek testovacích prúžkov (Pan a Pf) naznačuje negatívny výsledok.Test obsahuje vnútornú kontrolu (prúžok C), ktorý by mal vykazovať bordovo sfarbený prúžok imunokomplexu kozieho anti-myšieho IgG/myšieho IgG (konjugáty pHRP-II a pLDH-zlato) bez ohľadu na vývoj farby na ktoromkoľvek z testovacích prúžkov.V opačnom prípade je výsledok testu neplatný a vzorka sa musí znova otestovať iným zariadením.
