ZHRNUTIE A VYSVETLENIE TESTU
Viscerálna leishmanióza alebo Kala-azar je rozšírená infekcia spôsobená niekoľkými poddruhmi L. donovani.Svetová zdravotnícka organizácia (WHO) odhaduje, že toto ochorenie postihuje približne 12 miliónov ľudí v 88 krajinách.Na človeka sa prenáša uhryznutím piesočných mušiek Phlebotomus, ktoré sa nakazia kŕmením infikovanými zvieratami.Hoci ide o chorobu vyskytujúcu sa v chudobných krajinách v južnej Európe, stala sa hlavnou oportúnnou infekciou u pacientov s AIDS.Identifikácia organizmu L. donovani z krvi, kostnej drene, pečene, lymfatických uzlín alebo sleziny poskytuje jednoznačný spôsob diagnózy.Sérologický dôkaz anti-L.donovani IgM sa považuje za vynikajúci marker akútnej viscerálnej leishmaniózy.Testy používané na klinike zahŕňajú ELISA, fluorescenčné protilátky alebo priame aglutinačné testy 4-5.Nedávno použitie špecifického proteínu L. donovani v teste dramaticky zlepšilo citlivosť a špecifickosť.
Kombinovaný rýchly test Leishmania IgG/IgM je sérologický test na báze rekombinantného proteínu, ktorý súčasne zisťuje protilátky IgG a IgM proti L. Donovani.Test poskytuje spoľahlivý výsledok do 15 minút bez akýchkoľvek nástrojov.
PRINCÍP
Rýchly test Leishmania IgG/IgM je laterálny prietokový chromatografický imunotest.Testovacia kazeta pozostáva z: 1) bordovo sfarbenej konjugovanej podložky obsahujúcej rekombinantný antigén L. donovani konjugovaný s koloidným zlatom (konjugáty Leishmania) a konjugátmi králičieho IgG-zlato, 2) prúžku s nitrocelulózovou membránou obsahujúceho dva testovacie prúžky (pruhy T1 a T2) a kontrolné pásmo (pásmo C).Pás T1 je vopred potiahnutý monoklonálnym anti-humánnym IgM na detekciu anti-L.donovani IgM, T2 pás je vopred potiahnutý činidlami na detekciu anti-L.donovani IgG a C pás je vopred potiahnutý kozím anti králičím IgG.
Keď sa do jamky na vzorku v kazete nadávkuje primeraný objem testovanej vzorky, vzorka migruje kapilárnym pôsobením cez kazetu.Ak je L. donovani IgM prítomný vo vzorke, naviaže sa na konjugáty Leishmania.Imunokomplex je potom zachytený na membráne pomocou vopred potiahnutej anti-humánnej IgM protilátky, čím sa vytvorí vínový pás T1, čo indikuje pozitívny výsledok testu L. donovani IgM.L. donovani IgG, ak je prítomný vo vzorke, sa naviaže na konjugáty Leishmania.Imunokomplex je potom zachytený vopred potiahnutými činidlami na membráne, čím sa vytvorí bordovo sfarbený pás T2, čo naznačuje pozitívny výsledok testu L. donovani IgG.
Absencia akýchkoľvek T pásov (T1 a T2) naznačuje negatívny výsledok.Test obsahuje internú kontrolu (pás C), ktorý by mal vykazovať bordovo sfarbený pás imunokomplexu kozieho anti králičieho IgG/králičieho IgG-zlatého konjugátu bez ohľadu na vývoj farby na ktoromkoľvek z T pásov.V opačnom prípade je výsledok testu neplatný a vzorka sa musí znova otestovať iným zariadením.
